StressMarq商業投產α-突觸核蛋白寡聚體具有如下優點:
①高含量α-突觸核蛋白寡聚體
②動態學穩定 (kinetically stable/trapped)
③不含任何誘導劑或抑制劑 (多巴胺,EGCG)
④可用于活性電泳 (Native PAGE),體內體外檢測及疾病建模
⑤stressmarq能夠量產α-突觸核蛋白寡聚體
上圖為動態學穩定(kinetically stable) 的α-突觸核蛋白寡聚體(SPR-484) 電鏡圖。該寡聚體沒有使用任何誘導劑或抑制劑來鎖定寡聚體狀態,并且寡聚體含量能達到90%。
Stressmarq的SPR-484 的負染色透射電子顯微鏡圖像在 80 Kv 下使用磷鎢酸和醋酸鈾染色在碳涂層的 400 目銅網格上獲得。可以清晰的看到寡聚體結構,并且具有很高的均勻性。
動態學穩定的α突觸核蛋白寡聚體(SPR-484) 可在凍融后37℃下孵育兩周仍然穩定
(A)凍融一次后的動態學穩定寡聚體的Native PAGE
(B)和(C)分別是凍融一次后的和37℃孵育兩周后的尺寸排阻色譜(SEC)
在峰值處,90%SPR-484在凍融后37℃下孵育兩周仍然穩定于寡聚體狀態
動態學穩定的α突觸核蛋白寡聚體(SPR-484) 對多巴胺能神經元有毒性并且可以誘發帕金森病理現象(pSer129)
(A) 經寡聚體處理后 11 天,大鼠原代多巴胺能神經元的存活率由抗 MAP2 抗體量化并表示為對照的百分比
(B) 經寡聚體處理后 11 天,大鼠原代多巴胺能神經元中存在的 α-突觸核蛋白 pSer129 水平通過抗 α-突觸核蛋白 pSer129 抗體與抗 MAP2 抗體的比率量化,表示為對照的百分比
所有數據經過統計學驗證,而非偶然性結果
動態學穩定的α突觸核蛋白寡聚體(SPR-484) 在大鼠原代多巴胺能神經元中誘導帕金森相關的pSer129病理現象
(A)用對照PBS緩沖液處理后11天的大鼠原代多巴胺能神經元
(B) 用10 µg/mL SPR-484處理后11天的大鼠原代多巴胺能神經元
細胞核染色藍色(Hoechst),多巴胺能神經元顯示紅色(MAP2),病理現象為綠色(α-syn pSer129)
注:SPR-484為E.coli 表達的,在加入神經元之前沒有磷酸化
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